溶剂沉淀法

利用多糖在不同溶剂中的溶解度差异来实现分离。比如在多糖提取液中加入乙醇，大多数多糖会在一定浓度的乙醇溶液中沉淀析出，而蛋白质等杂质仍留在溶液中。通常将提取液浓缩后，缓慢加入 4-5 倍体积的无水乙醇，搅拌均匀，4℃静置过夜，离心收集沉淀，即可初步纯化多糖。

柱层析法

凝胶柱层析

基于多糖分子大小不同进行分离。常用的凝胶如葡聚糖凝胶（Sephadex）、琼脂糖凝胶（Sepharose）等。当多糖混合液通过凝胶柱时，大分子多糖不能进入凝胶颗粒内部，随洗脱液快速流出；小分子多糖进入凝胶颗粒孔隙，洗脱速度慢，从而实现分离。例如从香菇中提取的多糖，经凝胶柱层析后，可按分子大小获得不同组分。

离子交换柱层析

利用多糖分子所带电荷差异进行分离。若多糖含有酸性或碱性基团，可选用相应的离子交换树脂，如强酸性阳离子交换树脂（如 Dowex 50）、强碱性阴离子交换树脂（如 Dowex 1）等。带负电荷的多糖会与阴离子交换树脂结合，通过改变洗脱液的离子强度或 pH 值，使不同的多糖依次被洗脱下来，达到纯化目的。

酶解法

使用蛋白酶、核酸酶等去除多糖提取液中的蛋白质、核酸等杂质。例如，向多糖提取液中加入适量的胰蛋白酶，在适宜温度（如 37℃）和 pH 条件下反应一定时间，蛋白质被酶解为小分子肽段或氨基酸，再通过后续的分离方法（如离心、透析）除去酶解产物，从而提高多糖纯度。

膜分离法

利用不同孔径的膜对多糖溶液进行分离。超滤膜可截留大分子多糖，让小分子杂质（如盐类、单糖等）通过，实现初步纯化与浓缩。而反渗透膜能进一步去除更微小的杂质分子，提高多糖溶液的纯度。比如从灵芝多糖提取液中，先用超滤膜除去蛋白质等大分子杂质，再用反渗透膜除盐，可得到高纯度的灵芝多糖溶液。

季铵盐沉淀法

季铵盐类化合物（如十六烷基三甲基溴化铵，CTAB）能与酸性多糖形成络合物沉淀。在多糖提取液中加入适量 CTAB 溶液，酸性多糖会与之结合形成沉淀，而中性多糖等杂质则留在溶液中。沉淀经离心收集后，再用有机溶剂（如丙酮）洗涤，最后用稀酸溶液解离，释放出多糖，达到纯化酸性多糖的目的。